法規(guī)是國家意志的體現(xiàn)，是行業(yè)行動的指南。但只有法規(guī)要求，沒有技術參考標準，大家該怎么做呢？

2020 年 5 月14 日，國家藥監(jiān)局發(fā)布了62 號文《關于開展化學藥品注射劑仿制藥質量和療效一致性評價工作的公告》, 并同時發(fā)布了政策解讀， 宣告了注射劑一致性評價正式啟動。由此而來的將是數(shù)千億市場的大變局，以及技術和生產(chǎn)體系的大變革。同日，CDE關于發(fā)布62號文，包含《化學藥品注射劑仿制藥質量和療效一致性評價技術要求》等共3個技術文件，其中關于藥品包裝方面的嚴苛規(guī)定，使得整個行業(yè)面臨包裝系統(tǒng)相容性、包裝密封完整性技術難題。關于注射劑包裝系統(tǒng)相容性參考法規(guī)及技術指導原則較多。但關于包裝密封完整性的法規(guī)及可供參考的技術指導資料較少國外：

>USP <1207>無菌產(chǎn)品包裝完整性評價

> USP <1207.1 > 產(chǎn)品生命周期中的包裝完整性測試一檢測方法選擇和驗證

> USP <1207.2> 包裝完整性泄露測試技術

> USP <1207.3> 包裝密封質量測試技術國內(nèi)：

剛剛定稿的《化學藥品注射劑仿制藥質量和療效一致性評價技術要求》：穩(wěn)定性考察初期和末期進行無菌檢查，其他時間點可采用容器密封性替代。容器的密封性可采用物理完整測試方法（例如壓力/ 真空衰減等）進行檢測，并進行方法學驗證。

關于無菌制劑包裝密封完整性驗證方法，目前國內(nèi)還沒有出臺相關確定性方法的測試標準。就CDE關于這方面的發(fā)補內(nèi)容、解析及大家關心的常見問題，做下整理匯總，以期日后能夠繞開這些坑。

第一類：

發(fā)補內(nèi)容：

1、請?zhí)峁┰敿毴娴娜萜髅芊庑则炞C資料；

2、請?zhí)峁┌拿芊庑则炞C資料, 方法需經(jīng)適當?shù)尿炞C。

原因解析：這類發(fā)補是CDE比較早期的意見，可能資料提交的也早，導致這方面內(nèi)容的缺失，相信現(xiàn)在大家都不會有這種問題了。

第二類： 發(fā)補內(nèi)容：

1、請采用經(jīng)驗證 ( 靈敏度需符合要求 ) 的方法對凍融循環(huán)樣品和穩(wěn)定性試驗末期樣品進行包材密封性檢查；

2、請參照 USP1207等技術要求對完整性檢查，方法進行驗證,

注意研究明確方法的靈敏度, 注意與微生物浸入法等密封性檢查方法

靈敏度進行比較。

3、本品采用0.03%莧菜紅溶液抽真空法對滅菌后樣品進行完整 性檢查，研究中請關注完整性檢查參數(shù)和條件，包括莧菜紅溶液濃度、真空度、時間等參數(shù)）對方法靈敏度的影響。

4、請參照USP1207提供包裝系統(tǒng)密封性驗證資料, 如果方法的靈敏度無法達到USP1207規(guī)定的包裝產(chǎn)品較大允許泄露限度水平 , 建議采用微生物挑戰(zhàn)法進行包裝容器密封性的測試并進行驗證, 關注微生物的種類、菌液濃度、浸入時間等。

原因解析：這類發(fā)補是沒有進行方法靈敏度研究，雖然做了驗證， 但所采用的驗證方法屬于概率法，在實驗設計中沒有考慮到諸多因素對概率法的影響，導致實驗結果不可靠。有的案例用傳統(tǒng)方法比如色水法，并沒有驗證方法能檢測的較小漏孔（即靈敏度），也沒有與實際無菌控制的微生物侵入法進行靈敏度比較，無法說明擬采用的方法比現(xiàn)行的無菌控制方法檢出能力更高。

第三類：

發(fā)補內(nèi)容：

1、請進一步研究驗證包裝密封性：對驗證所用的真空泄漏染色 法和微生物侵入法，需結合理論測算泄漏尺寸進行實際陽性對照試驗的確認（應注意陽性對照泄漏空隙尺寸選擇的合理性） ，以進一步確認檢測方法的靈敏度。必要時還需對兩種方法進行對比，進一步確認泄漏風險與檢出能力的關系；

2、請?zhí)峁┤萜髅芊庑则炞C資料，建議采用兩種方法對比驗證，

驗證過程中應設定陽性對照組，同時關注驗證方法的靈敏度；

3、密封性驗證方法可采用確定性檢漏方法（如高壓放電檢漏法、真空衰減法）和概率性的檢漏方法（如微生物侵入法、色水法），同時設立陽性對照組進行對比驗證（包括方法的靈敏度），請采用至少兩種方法驗證本品容器的密封性；

4、建議參照USP<1207、1207.1 、1207.2 、1207.3> 或注射劑相關行業(yè)指南繼續(xù)完善容器密封性驗證研究資料，評估包裝容器對樣品的保護性和適應性。驗證方法可采用確定性檢漏方法（如：激光頂 空法、真空衰減法）和概率性檢漏方法（如：微生物侵入法、色水 法），同時設立陽性對照組進行對比驗證（包括方法的靈敏度）。若采用概率性檢漏方法驗證，請明確驗證樣本量的依據(jù)。

原因解析： 這類發(fā)補除了上面已提到的內(nèi)容，都有一個共性問題就是缺少陽性對照組。有的藥企在做密封性研究時， 只是用到設備驗證的標準漏孔，并沒有在實物上制備陽性樣品，因此受到了藥審中心的挑戰(zhàn)。有的藥企雖然制備了陽性樣品，但是陽性樣品制備方法不合理，比如用針扎一下膠塞，然后拔掉，即完成了陽性樣品制備。

以上發(fā)補信息得出以下結論：

1 、 密 封 性 是 否 要 做 ？ 答案是肯定的，密封性必須要做。

2、密 封 性 怎 么 做？

應當驗證所用包裝密封性方法的靈敏度，驗證方式嚴謹科學；不管用什么方法申報， 應當和微生物侵入法關聯(lián)。如選用二種以上方法驗證，必要時所有方法之間要相互關聯(lián)。

3、陽 性 樣 品 是 否 必 需？

答案是肯定的，必須用陽性樣品來驗證檢測限（靈敏度），不能僅通過儀器自帶的微型流量計或者標準漏孔來確定檢測限。

激光打孔技術，是美國 FDA公認的，USP1207引用的權威的陽性樣品制備技術?？刹捎眉す獯蚩追绞街苽潢栃詷悠罚啾绕渌苽浞椒ǖ膬?yōu)勢在于：漏孔幾何形狀和內(nèi)部氣體流動行為盡可能接近真實缺陷，激光打孔產(chǎn)生的泄漏通道是不規(guī)則的曲折通道，非常接近真實的缺陷。每一個漏孔都有配置漏孔校驗證書，確保漏孔尺寸可追溯。當前，激光打孔技術在硬質玻璃或塑料材質上可打的孔徑大約小至3um，如果更小的孔很容易被環(huán)境的灰塵雜質堵塞。

不管進行確定方法的開發(fā)驗證還是概率性方法的試驗設計，陽性樣品的選擇都要謹慎，盡量選擇流量計量校準方式的樣品。有研究表明采用光學檢測計量方式的樣品孔徑與泄漏率線性較差。

其他常見問題：

1、USP<1207 > 《無菌制劑包裝完整性評估》中規(guī)定硬質容器最大

允許泄露限值可以采用0.1-0.3um。具體如何開展試驗？

首先，包裝最大允許泄漏限值是依據(jù)產(chǎn)品的理化特性及微生物屬性要求確定，具有產(chǎn)品針對性。最大允許泄漏限值的設定可參照PDA Technical Report No. 27 Pharmaceutical Package Integrity (1998) 。開展完整性評估時，一定要先依據(jù)產(chǎn)品的理化特性及微生物屬性要求建立泄漏率標準（或最大允許泄漏限值），然后根據(jù)泄漏率標準進行包裝完整性研究及驗證，用驗證結果證明產(chǎn)品在受控的狀態(tài)下生產(chǎn)，可以確保其在運輸、儲藏及使用過程中的包裝完整性，也就是沒有超過最大允許泄漏限值的泄漏。如不建立最大允許泄漏限值，直接采用0.1-0.3μm也可以，該限值默認可以保證無菌產(chǎn)品的理化 特性和無菌性。采用0.1-0.3μm作為最大允許泄漏限值，就要選擇靈敏度可以達到該限值的檢測方法，例如氦質譜法，并進行相應的方法學驗證。此時可以不進行物理方法和微生物方法相關性研究，因此限值已知遠較微生物方法靈敏，進行合理性說明即可。目前國內(nèi)常見的確定性方法靈敏度都達不到MAll值，需要和微生物方法進行關聯(lián)研究。

2、在開展物理方法和微生物方法的比對時，使用毛細管（內(nèi)徑10um,長度5mm)方式制作陽性樣品，在微生物方法中為陰性（未見有菌生長）。是否有相關的經(jīng)驗可以借鑒？

使用毛細管（微型管）法制備陽性樣品，其毛細管的長度、管內(nèi) 是否含有氣體，都會對微生物的侵入產(chǎn)生較大的影響，并可能產(chǎn)生假陰性的結果；故陽性樣品的制備非常重要，一方面要盡量模仿產(chǎn)品實際泄漏的情況，一方面要避免產(chǎn)生假陰性結果的影響因素，如避免因毛細管過長（盡量接近包材本身的厚度）或避免管內(nèi)含有氣體。另外還可以在外部施加一定的壓力，以保證微生物的檢出概率。

3、在開展微生物法和色水法對比研究時，兩種方法在5μ m 和10μm孔徑下，陽性樣品的通過率均為100%，以上結果，是否需要進一步開展2-3 μm的微生物挑戰(zhàn)試驗？

傳統(tǒng)意義上無菌制劑的包裝完整性是指其能夠通過微生物挑戰(zhàn)試驗驗證。一般參照USP <1207.1> 和 USP <1207.2> 確定微生物挑戰(zhàn)法的檢出限指標分級，進而參照USP<1207.1>中“表 1- 包裝完整性測試方法泄漏檢測指標”，對應選擇合適的泄漏孔徑，孔徑的選擇無須迎合微生物的尺寸；然后制備陽性樣品和陰性樣品，進行相應的方法驗證。如擬采用色水方法進行替代則應進行二種方法的靈敏度比對，驗證色水方法的檢測限是否低于微生物方法。

4、關于靈敏度的判斷標準：USP1207中舉例提到檢出率略低于100%，例如95%對應的陽性孔徑為該方法的靈敏度， 國內(nèi)會如何要求？低于100%的檢出率為80%或者更低，能否被認可？USP <1207> 標稱的靈敏度孔徑需保證95%檢出率，如大于該孔徑，必須實現(xiàn)檢出率100%。從科學上講， 低于100% 的檢出率為80%或者更低作為檢測限，產(chǎn)生的結果難以作出判斷。鑒于目前我國尚未有相關的技術指導原則，USP <1207> 規(guī)定的靈敏度標準是可借鑒的參考；如國家局出臺相應的技術指導原則，應以我國的技術指導原則為準。

5、生產(chǎn)過程中包裝完整性檢測，對抽檢的數(shù)量是否有相關的規(guī)定？在生產(chǎn)過程中包裝完整性檢測一般為初期、中期和末期，根據(jù)批量、包裝規(guī)格的不同，設定不同的抽樣標準。暫無統(tǒng)一的尺度要求。